Méthodes d’étude de la nutrition de la cellule cancéreuse dans le cas de l’insulino-résistance produite sur l’organisme entier par un facteur sérique thermo-induit (TIF) et de la captation récepteur-médiée de la vitamine B12 par la lignée cellulaire H T 29

Abstract

Actuellement, les perspectives thérapeutiques s’intéressent au traitement moléculaire du Cancer et envisagent, entre autre, d’intervenir au niveau de l’utilisation de facteurs plasmatiques nutritionnels. Dans ce travail, nous nous intéressons à ce type du moyen d’action anti-tumorale à travers deux nutriments essentiels à la multiplication cellulaire en général, le glucose et la vitamine B 12. Nous étudions en premier lieu, l’utilisation spécifique du glucose par la cellule cancéreuse en considérant la perturbation de la régulation glycémique (hyperglycémie) observée lors du traitement du cancer par l’hyperthermie. La molécule responsable de cette perturbation appelée TIF (Temperature-Induced-Factor) est d’origine sérique, elle a été isolée à partir de sérum de rat chauffé à 44°C pendant 15 minutes, elle empêcherait l’utilisation du glucose par la cellule. Nous présentons une purification complète de ce facteur sérique, en quatre étapes chromatographiques utilisant des colonnes préparatives et semi préparatives de gel filtration et de chromatographie liquide à haut performance. Nous étudions les effets du sérum chauffé et du TIF sur le métabolisme glucidique du rat, afin de comprendre les mécanismes responsables de cette perturbation. Différents métabolites intermédiaires du métabolisme glucidique et certaines hormones sont dosés. Le taux de renouvellement du glucose et la clairance métabolique sont également mesurés par une technique de perfusion continue de glucose tritié. Nous considérons l’action anti-tumorale du sérum chauffé sur les rats porteurs de rhabdomdyosarcome, en testant l’évolution des tumeurs et la survie des animaux, après injection de sérum chauffé, dont l’effet sur les différents paramètres du métabolisme glucidique est comparé par rapport aux rats sains. Nous considérons en deuxième lieu, l’utilisation spécifique de la vitamine B12 par la cellule cancéreuse en étudiant le mécanisme de captation de ce micronutriment au niveau de la lignée cellulaire cancéreuse colique HT29. Nous nous intéressons particulièrement au complexe transcobalamine II-vitamine B12, le transport plasmatique de la vitamine B12 étant essentiellement effectué par la transcobalamine II. Nous réalisons des études de liaison sur les cellules HT29 et sur leurs membranes en utilisant de la vitamine B12 marquée au cobalt 57 et de la transcobalamine II marquée à l’iode 125. Les résultats ayant abouti à la présence d’un récepteur de la transcobalamine II au niveau des cellules HT29, nous considérons certains paramètres pouvant intervenir lors de la liaison du complexe transcobalamine II-vitamine B12 sur les cellules HT29. Nous réalisons enfin une caractérisation du récepteur de la transcobalamine II par pontage covalent t autoradiographie.