Isolement et caractérisation des phospho-peptidomannannes impliqués dans la floculation des levures Kluyveromyces bulgaricus

Abstract

Les levures sont généralement définies comme étant des champignons unicellulaires. Comme les champignons filamentaux (Ascomycétes et Basidiomycétes), elles sont limitées par une paroi épaisse. Certaines espèces, voire des souches de levures, présentent la capacité de former des agrégats dans les milieux de culture où elles étaient en suspension. Il s'agit du phénomène de floculation qui est basé sur les interactions entre les parois des levures. L'ensemble de l'expérimentation porte sur les molécules intervenant dans les phénomènes de floculation chez Kluyveromyces bulgaricus. Les levures Kluyveromyces bulgaricus sont des souches diploïdes; l'étude des PPM de la paroi montre que la proportion des constituants de la paroi varie suivant les conditions de culture. La souche cultivée en présence de calcium est floculante alors que celle cultivée en absence de calcium est non floculante. Les PPM ont été obtenus par traitement des cellules fraiches par autoclavage dans un tampon citrate pH 7 (Peat, 1961). ils sont ensuite fractionnées par coprécipitation avec le cétavlon. L'analyse chimique des trois fractions FI, FII et FIII obtenues après le fractionnement a révélée que la fraction FII contient un pourcentage plus élevé en oses et est essentiellement mannosidique. La fraction FI est riche en phosphates et contient la teneur la plus faible en protéines. La fraction FIII est essentiellement glycomannosidique. Les courbes de titration des acides aminés ne présentent qu'un seul point d'inflexion, les phosphates des PPM sont doc sous forme phosphodiester. L'estimation des masses moléculaires des PPM par filtration sur gel montre que dans la fraction floculante la masse moléculaire est plus importante, elle est de 380 Kda, alors que chez les cellules non floculantes, elle est de 282KDa. L'étude de la partie protéique des PPM natifs (bruts) et les produits de fractionnement révèle que 7 acides aminés sont majoritaires à savoir, Thr, Ser, G1n, Asn, Pro, Gly et Ala avec des taux variant de 69% à 85%. de ces 7 acides aminés, ce sont les Ser + Thr qui varient le plus avec la floculation. Les PPM extraits ont une différence de stabilité vis à vis d'agents de fractionnement, comme l'imidazole ou le ß-mercaptoéthanol que les PPM de la souche non floculante.