Anticorps monoclonaux dirigés contre le système de groupes sanguins ABO : Production, caractérisation et utilisation diagnostique en transfusion sanguine

Abstract

Les anticorps monoclonaux sont des molécules très utilisées et très importantes en diagnostic, en thérapie et en recherche. Ce sont des outils de choix pour les études d’interactions moléculaires grâce à leur spécificité très précise. En transfusion sanguine, ils ont remplacé les anticorps polyclonaux vu les avantages d’approvisionnement et la réduction du coût pour la détermination des groupes sanguins. L’objectif de ce travail est de mettre au point au laboratoire la technique des hybridomes et la technique de la transformation par le virus de l’Epstein Barr (EBV) afin de produire des lignées propres au laboratoire qui sécrètent des anticorps monoclonaux dirigés contre les antigènes des groupes sanguins ABO et Rhésus. Les anticorps monoclonaux issus de ces lignées sont ensuite caractérisés et évalués pour produire des réactifs de routine pour les groupages sanguins ABO et Rhésus des sonneurs de sang et des malades. Le signées 150AB19 et A2210 produisant respectivement des anticorps monoclonaux anti-AB et anti-B et la lignée A05 produisant l’anticorps monoclonal anti-A, sont obtenues par la technique des hybridomes alors que la lignée HATRA qui produit de l’anti-B et la lignée 7JP3 qui produit de l’anti-AB sont obtenus par la technique de la transformation par l’EBV. En revanche aucune lignée stable produisant l’anti-D n’a été obtenue. Après avoir stabilisé les hybridomes et les hétérohybridomes par clonages successifs par dilution limite, les anticorps monoclonaux sont produits sous forme de surnageants de culture. Ces derniers ne représentent pas les réactifs de groupages sanguins finis puisqu’ils ne répondent pas aux normes internationales. Des changements du milieu réactionnel sont opérés par concentration, dialyse et ajustement des facteurs physico-chimiques afin d’optimiser la réactivité des anticorps. En effet, le titre des surnageants de culture est de 32 à 64, le score de 42 à 59, l’intensité d’agglutination de + à ++ et l’avidité est supérieure à 5 secondes. Devenus réactifs, les anticorps présentent des titres de 512 à 1024, des scores de 88 à 103, des intensités d’agglutination de ++++ et des avidités inférieures à 5 secondes. Le contrôle de qualité interne réalisé par le laboratoire national de contrôle de qualité du Maroc et le contrôle de qualité externe réalisé par le Centre National de Référence pour les Groupes Sanguins de Paris (France), ainsi que le contrôle bactériologique, virologique et sérologique de ces réactifs montrent qu’ils sont conformes aux normes internationales exigés. Ces réactifs sont utilisés dans tous les Centres de Transitions Sanguine (CTS) et banques de sang du Maroc.