Métabolisme des phospholipides dans les plaquettes du rat spontanément hypertendu

Abstract

Afin de rechercher une origine moléculaire du dérèglement de l’homéostasie calcique observé dans la cellule du muscle lisse vasculaire dans l’hypertension primaire, nous avons étudié et comparé le métabolisme des phospholipides membranaire chez le Rat spontanément hypertendu (SHR) et son témoin normotendu WKY. En raison des nombreuses analogies existantes entre les cellules du muscle lisse vasculaire et les plaquettes sanguines, ces dernières constituent un modèle intéressant pour étudier le métabolisme du calcium chez le sujet hypertendu et pour tenter d’identifier l’anomalie qui pourrait intervenir dans la pathogénèse de l’hypertension. Dans les plaquettes, comme d’ailleurs dans nombre d’autres cellules où les réponses physiologiques sont dépendantes de la concentration en ions calcium libre dans le cytosol, il est maintenant bien établi que c’est le déclenchement du métabolisme des phospholipides contenant l’Inositol (c'est-à-dire phosphoinositides) qui constitue l’étape initiale dans la mobilisation de calcium. Les phosphoinositides comprenent le phosphatidyl inositol (PI), la phosphatidylinositol 4 phosphate (PIP) et le phosphatidylinositol 4,5 biphosphate (PIP₂). Lors de la stimulation des plaquettes par la thrombine par exemple, c’est l’hydrolyse de PIP₂ par une phospholipase C qui initie le processus d’activation cellulaire. Dans la 1ère partie de ce travail, nous avons donc étudié et comparé le métabolisme des phosphoinositides dans les plaquettes du Rat SHR et de son témoin normotendu WKY : à l’état basal, dans les plaquettes au repos c'est-à-dire non stimulées et lors de l’activation plaquettaire par la trombine. Pour ce faire, les plaquettes isolées sont marquées au ³²P et la mesure de la radioactivité associée à PI, PIP, PIP₂ et à l’acide phosphatidique (PA), permet l’analyse quantitative et comparative du métabolisme de ces lipides dans les deux souches de rats. Des réponses physiologiques à la thrombine telles que l’agrégation et la sécrétion de sérotonine (5HT) sont mesurées en parallèle. Nos résultats montrent que dans les plaquettes non activées, le métabolisme basal des phosphoinositides est identique et suggèrent que les quantités de PI, PIP, PIP₂ et PA sont identiques. Lors de l’activation par la thrombine nos résultats montrent que comparées aux plaquettes de WKY, celles de SHR se sont avérées plus réactives en ce qui concerne les réponses physiologiques (Agrégation et sécrétion de sérotonine) et ce qui concerne l’hydrolyse et la resynthèse des phosphoinositides. Nos résultats montrent donc une hyperréactivité de plaquettes de SHR vis-à-vis de la thrombine. Cette hyperréactivité serait due à l’activité accrue de la phospholipase C que nous avons montrée chez SHR. Puisque les plaquettes libèrent un grand nombre de substances vasoactives, leur hyperréactivité chez SHR peut être liée au spasme artériolaire observé dans l’HTA primaire, et aux thombi vasculaire fréquentes dans cette pathologie. Afin d’essayer de déceler une cause éventuelle de l’altération de cette enzyme qui agit au niveau membranaire nous avons dans la 2ème partie de ce travail, étudié et comparé le métabolisme des autres phospholipides dans les plaquettes des deux souches en faisant de marquages isotopiques avec différents précurseurs radioactifs (³²P, ³H glycérol, H choline ). Nos résultats montrent que dans les plaquettes de SHR, non stimulées le marquage de la PC est plus rapide que dans celles de WKY. La composition de membranaires plaquettaire de phospholipides s’est avérée similaire entre les 2 souches. Ceci montre donc que le marquage accru de PC que nous avons observé représentait une vitesse de renouvellement rapide et non une synthèse nette. Ce renouvellement rapide mettant en jeu toute la tête polaire de PC serait dû à l’activité accrue d’une phospholipase C spécifique pour PC. Cette enzyme n’avait jamais été décrite dans la plaquette sanguine. Ce renouvellement rapide de PC chez SHR pourrait provoquer des anomalies membranaires pouvant expliquer plusieurs altérations observées dans plusieurs métabolismes membranaires dans l’hypertension artérielle. Chacune de ces deux phospholipase C hyperactives chez SHR pourrait être impliquée directement où indirectement dans la genèse et (ou) le maintien de l’hypertension artérielle chez le rat spontanément hypertendu.