Etudes sur la glycéraldéhyde 3-phosphate déshydrogénase de Clostridium pasteurianum : Isolement et structure d'un fragment de 3,7 kb contenant son gène : Expression de ce gène chez Escherichia coli et 2tude des caractéristiques de l'enzyme

Abstract

Nous avons mis au point une technique de préparation du DNA génômique de C. pasteurianum. Une banque de DNA génômique de cette bactérie dans E. coli a été construite en utilisant le plasmide pBR322 comme vecteur. Le plasmide pCGap 1 complémentant le mutant d’E. coli GAPDH – DF221 sur milieu glucose a été isolé et étudié. Ce plasmide contient un fragment de 3,7 kb, renfermant le gène de la GAPDH de C. pasteurianum. La séquence nucléotidique complète de ce fragment a été déterminée par la technique de SANGER. Nous avons ainsi pu montrer que ce segment renfermait 2 gènes complets et un fragment de gène, l’extrémité 3’ du fragment cloné étant située dans ce dernier. L’examen de la séquence nucléotidique en amont des régions codantes contenues dans le fragment cloné a révélé l’existence de signaux potentiels de transcription et de traduction de ces gènes. Ces séquences ont été comparées aux séquences promotrices d’autres gènes de C pasteurianum. Ceci nous a permis d’établir un premier consensus montre la présence de séquences additionnelles non seulement, par rapport aux séquences trouvées dans les promoteurs de bactéries gram négatif mais aussi par rapport à celles déjà déterminées pour les bactéries gram positif. Notamment un doublet AT en position -29 et -30 est conservé dans l’ensemble des gènes séquencés de C. pasteurianum. Les séquences homologues au site de fixation du ribosome, identifiées en amont des régions codantes, montrent un fort degré de complémentarité avec l’extrémité 3’ du rRNA 16S de bactéries, caractéristiques des gènes de bactéries gram positif. Nous avons également montré que le gène de la GAPDH de C. pasteurianum, cloné dans le plasmide pCGap4, s’exprime à partir de son propre promoteur chez E. coli.