Mise au point de milieu, à partir de lactosérum, pour la culture d'hybridomes : Etude préalable du métabolisme cellulaire en vue de l'optimisation de la production d'anticorps monoclonaux

Abstract

La culture in vitro de cellules eucaryotiques nécessite un milieu de base et de sérum. Ce dernier est souvent substitué par des milieux partiellement ou complètement définis ou par des liquides biologiques tels que le colostrum humain ou bovin. Dans ce travail, nous avons étudié la substitution de sérum de veau fœtal (SVF) par des fractions de lactosérum industriel, pour la culture de trois souches d’hybridomes. Dans un premier temps, nous avons étudié l’activité biologique de ces fractions en culture cellulaire. Deux tests ont été utilisés : le test de croissance à court-terme dans lequel est mesuré l’incorporation de ³H-thymidine dans l’ADN des hybridomes et le test de prolifération à long-terme par comptage cellulaire. Le premier nous a permis de sélectionner les fractions les plus actives (LB S65 et LEL M). Avec le deuxième test nous avons montré que l’activité de ces deux fractions (LB S65 et LEL M) n’est possible qu’en présence d’une faible concentration de SVF (lactosérum 9% + SVF 1%) et est voisine de celle obtenue dans les milieux contenant 10% de SVF (80 à 90%). De même, les hybridomes utilisés n’ont pas besoin d’adaptation préalable lors de leur culture dans ces milieux substitués. Dans un deuxième temps, nous avons étudié la composition physico-chimique des fraction sélectionnées, il en découle qu’elles sont riches en certaines substances utilisées dans des milieux définis tels que : des hormones, des facteurs de croissances des lipides, des protéines, des oligo-éléments. L’étude préalable comparative du métabolisme cellulaire dans les milieux substitués à base de lactosérum par rapport aux milieux témoins contenant le SVF, a été réalisée dans deux systèmes : culture en "batch" sur flacons statiques et culture "récolte-recharge" en flacons spinners. Les résultats obtenus montrent en général que la sécrétion spécifique d’anticorps monoclonaux est plus importante dans les milieux substitués. De même la viabilité cellulaire est prolongée dans ces derniers, bien qu’une accumulation en ammoniaque soit plus élevée. Dans le domaine de la cryoconservation, nous avons montré que le lactosérum permet de se passer de l’utilisation de l’azote liquide et conserve les hybridomes seulement à -80° C et pendant au moins une durée de deux ans. En conclusion, la substitution du SVF par du lactosérum a des avantages aussi bien d’ordre économique que pratique.