Recherche des molécules bioactives naturelles à effets leishmanicide et staphylococcique et valorisation de leurs pouvoirs trypanocide et amoebicide

Abstract

La recrudescence des germes résistants aux antimicrobiens constitue un problème majeur de santé publique. La recherche de nouvelles molécules bioactives est donc un enjeu crucial. Dans ce contexte, des plantes supposées guérir les infections cutanées sont sélectionnées auprès des herboristes de la région Fès-Meknès. Les plantes retenues ont fait l'objet de fractionnements bioguidés pour identifier les composés actifs sur Leishmania spp. et Staphylococcus aureus fréquemment isolés dans ce type de pathologie dans la région d’étude. 64 espèces sont répertoriées, mais 15 plantes montrant un indice de fréquence de citation élevé et un apport bibliographique faible pour chaque germe cible sont évaluées quant à leurs propriétés antimicrobiennes. Le test qualitatif par macrodilution en milieu solide a révélé que l’extrait éthanolique de Rhamnus alaternus est le plus actif sur les souches de S. aureus alors que le test de microdilution a montré que l’extrait éthanolique d’Inula viscosa est le plus actif sur Leishmania spp.. Le fractionnement bioguidé et les analyses spectroscopiques et spectrométriques (RMN, EIMS et HREIMS) de l’extrait de Rhamnus alaternus a donné comme composés actifs l’émodine et le kaempférol. Toutefois l’émodine s’est avérée la plus active vis-à-vis des souches de staphylocoques avec des CMIs de 1,93 et 15,63 μg/ml et des valeurs de CC50> 100 μg/ml témoignant la non-toxicité de ce composé. Le fractionnement bioguidé de l’extrait d’Inula viscosa par de multiples étapes chromatographiques impliquant des colonnes sur gel de silice et de sephadex LH-20, des chromatographies centrifuges et préparatives a permis d’identifier à l’aide des techniques spectroscopiques et de corrélation (RMN, HMBC, HSQC et ROESY) huit composés dont quatre (8-epi-xanthatin-1β,5β-epoxide et inuloxin A, sakuranétine et taxifoline) se sont révélés les plus actifs vis-à-vis des espèces cibles, Leishmania amazonensis et Leishmania donovani avec des CI50s entre 9,53 et 86,45 μM pour les promastigotes, et entre 0,64 et 6,98 μM pour les amastigotes. Les quatre composés ont été évalués pour leur cytotoxicité sur une lignée cellulaire des macrophages murins (J774A.1) et le dosage fluorométrique par le réactif AlamarBlue a montré que les composés ne sont pas toxiques à la dose testée. Ces quatre composés anti-Leishmania se sont révélés également actifs vis à vis de Trypanosoma cruzi alors que Naegleria fowleri a été sensible à l’inuloxin A seulement. Le mécanisme d’action de ces quatre composés a été élucidé en utilisant les kits de viabilité cellulaire et de détection des évènements typiques de l’apoptose. Les résultats ont montré que ces composés ont induit des évènements de type apoptotique chez L. amazonensis, L. donovani, T. cruzi et N. fowleri par l’altération de la perméabilité membranaire (kit SYTOX Green), la condensation de la chromatine (double kit Hoechst 33342/PI), la perturbation du fonctionnement de la mitochondrie (sonde JC-1), et la réduction des niveaux de production de l’ATP (CellTiter-Glo) en plus de la régénération des ROS (kit CellROX) chez L. amazonensis, T. cruzi et N. fowleri.