Etude de deux protéines majeures -76 et 14 kDa - libérées au pôle apical des cellules épitheliales de la vessie d'amphibiens : Leur rôle dans le contrôle hormonal de la perméabilité hydrique

Abstract

L’hormone antidiurétique (ADH) induit, au pôle apical des cellules épithéliales de la vessie d’amphibiens, la mise en place d’agrégats de particules spécifiques, représentant vraisemblablement les canaux hydriques transmembranaires. L’ADH, comme les esters de phorbol ou l’étirement mécanique de la vessie, induit également l’exocytose de granules sous apicaux. Au cours de ce travail, nous avons analysé le matériel protéique libéré dans ces différentes conditions et recherché son implication éventuelle dans le contrôle des propriétés physiologiques de cette barrière épithéliale. L’électrophorèse sur gel de polyacrylamide des extraits obtenus fait apparaître deux bandes majoritaires de 76 et 14 kDa et leur analyse par chromatographie (HPLC) permet d’isoler deux polypeptides de poids moléculaires apparents 110 et 80 kDa correspondant à la 76 kDa et deux autres, d’un même poids moléculaire (environ 20 kDa), correspondant à la 14 kDa. Seules les protéines 76 kDa sont glycosylées et ont des points isoélectriques (pI) de 6,1 et 5,1. Les deux peptides de 14 kDa ont des pI de l’ordre de 7,4. Ces protéines ne semble pas impliquées dans la régulation du Ca⁺⁺ cellulaire et n’affectent pas directement la réponse hydrosmotique à l’ADH. Cependant, le transport basal de Na+ est légèrement augmenté (environ 25%) sans que la réponse natriférique à l’ADH soit altérée. Si les anticorps anti-76 kDa n’affectent pas la perméabilité hydrique, les anticorps anti-14 kDa réduisent l’intensité de la réponse à l’ADH par un mécanisme complexe qui nécessite la réinternalisation des agrégats contenant les canaux hydriques. En utilisant les anticorps dirigés contre les protéines 76 ou 14 kDa, nous avons localisé, par immunocytochimie, ces deux protéines au niveau apical et au niveau du contenu granulaire. Ces résultats suggèrent que les 76 et 14 kDa pourraient participer au renouvellement membranaire et à la mise en place d’un glycocalyx riche en mannose; par ailleurs, une implication plus directe de la protéine 14 kDa dans la régulation de la perméabilité membranaire à l’eau et aux électrolytes n’est cependant pas à écarter.