Interactions virus-hôte : Contribution à l'étude du contrôle de la multiplication du rhabdovirus Sigma par le gène ref(2)P de Drosophila melanogaster

Abstract

Ce travail est une contribution à l’étude d’un mécanisme de restriction de la multiplication du virus sigma dans Drosophila melanogaster. Nous décrivons l’expression du gène ref(2)P dans le système baculovirus-cellules de lépidoptère. On a pu obtenir jusqu’à 100mg/l de protéine ref(2)P. Purifiée en conditions dénaturantes, cette protéine a été utilisée pour obtenir des anticorps polyclonaux dirigés contre la protéine totale. Ces anticorps nous ont permis de montrer que la protéine ref(2)P est localisée principalement dans le cytoplasme des cellules. Ces anticorps nous ont également permis de confirmer que l’expression de ref(2)P est ubiquitaire. Nous présentons dans ce travail les résultats d’expériences préliminaires de purification de la protéine dans des conditions non dénaturantes. Nous présentons également le clonage du gène (sup) suppresseur du phénotype de stérilité des mâles homozygotes ref(2)Pnul. Nous avons obtenu 11 lignées mutantes de sup après mutagenèse au transposon P. Nous avons vérifié pour 2 lignées mutantes que le caractère suppresseur était très lié au phénotype scarlet (st) comme le sont les allèles suppresseurs naturels. Nous avons également contrôlé qu’un transposon P très lié à st corecombinait avec le caractère suppresseur et qu’enfin la remobilisation de ce transposon provoquait la disparition du phénotype suppresseur. L’ensemble de ces données ne laisse aucun doute : le gène sup a été étiqueté par un transposon P. Le clonage d’ADN provenant de l’environnement génomique de ce transposant et son utilisation comme sonde a permis de "poser" et orienter cet ADN sur la carte génétique et confirmer son appartenance au locus sup.