Caractérisation des proteoglycannes élaborés par les cellules de Sertoli de testicule de rat en culture

Abstract

Le but de ce travail était de caractériser les protéoglycannes (PG) synthétisés par les cellules de Sertoli de rat en culture. Ces cellules ont été incubées pendant 48h en présence de (35S)-sulfate. Après récupération du milieu de culture, le tapis cellulaire est extrait séquentiellement avec : 1) PBS contenant 100 μg/ml d’héparine (extrait péricellulaire) ; 2) 0,2 % Triton X-100 (extrait membranaire et intracellulaire) ; 3)Urée 4M, 1% Triton X-100 (extrait matrice extracellulaire). Les macromolécules 35S du milieu correspondent à trois types de PG : un PG à héparanne sulfate (HSPG) (25%), un PG à chondroïtine sulfate (CSPG) (25%) et un PG mixte (HSCSPG) (50%) dont les chaînes de CS sont plus courtes que celles du CSPG. Dans le matériel péricellulaire, deux PG différents ont été détectés : un HSPG (70%) et un CSPG (30%) de poids moléculaires très voisins. Dans la matrice extracellulaire, un PG unique a été mis en évidence ; l’axe protéique de ce PG porte à la fois des chaînes de HS et de CS. L’extrait membranaire et intracellulaire contient 20% de matériel hydrophobe correspondant à du HSPG ; ce matériel peut être inséré des liposomes, montrant que ce PG pourrait être ancré dans la membrane plasmique. Dans le but d’étudier cette possibilité, les membranes de cellules de Sertoli ont été isolées et soumises à l’action du Triton X-100. Le PG solubilisé à partir des membranes est identique (même PM, mêmes chaînes d’HS) au PG hydrophobe de l’extrait Triton du tapis cellulaire, prouvant que ce matériel est bien issu des membranes cellulaires. Le mode d’ancrage des PG dans la membrane cellulaire a été étudié par digestions séquentielles des cellules de Sertoli avec la trypsine et la phospholipase C spécifique du phosphatidylinositol. Cette expérience a montré que 65% des PG sont ancrés dans la membrane par un segment hydrophobe de la core protein et 35% à travers un phosphatidylinositol lié au PG par une liaison covalente.