Mise en évidence et caractérisation par des méthodes immunologiques de sécrétions glycoprotéiques au niveau du diencéphale dorsal : ( Etude particulière d’une structure circumventriculaire : L’organe sous-commissural du bœuf adulte et de l’embryon de poulet )

Abstract

L’organe sous-commissural(OSC) est une différenciation épendymaire du diencéphale dorsal dont les épendymocytes synthétisent et relarguent en permanence des glycoprotéines dans la lumière du 3ème ventricule. Celles-ci s’aggrègent et forment dans le canal épendymaire une structure fibrillaire appelé fibre de Reissner. L’objet principal du présent travail était de progresser dans l’analyse de ce processus sécrétoire et de sa mise en place au cours du développement par des méthodes histochimiques et immunochimiques. Nous avons également tenté d’apporter une contribution à l’étude des relations pouvant exister entre un choc osmotique et l’activité sécrétrice de l’OSC. Grâce à l’utilisation de lectines fluorescentes (Con, A, WGA, LCA PHA-E et PHA-L) nous avons pu établir la synthèse de glycoprotéines de type complexe et nous avons proposé une structure pour les chaînes oligosaccharidiques des glycoprotéines de l’OSC chez les mammifères et les oiseaux étudiés à différentes étapes de leur biosynthèse. Deux types d’anticorps polyclonaux ont été chez le lapin contre, respectivement, un broyat d’OSC d’embryon de poulet de 19j(A74IgG) et un broyat d’OSC de bœuf adulte (AggIgG). Ces anticorps, épuisés et purifiés, reconnaissent les sécrétions glycoprotéiques de l’OSC comme le montrent nos différents tests : 1°) en immunohistofluorescence 2°) après inhibition compétitive avec les lectines et 3°) après digestion enzymatique. L’étude ontogénétique, conduite chez l’embryon de poulet en utilisant l’A74IgG, montre qu’au stade 4J d’incubation, certains épendymocytes de l’OSC contiennent du matériel immunoréactif. La différenciation de l’activité sécrétrice de ces cellules s’effectue selon un gradient rostro-caudal. La mise en place de la fibre de Reissner intervient au stade 11j d’incubation. L’étude immunochimique, réalisé grâce aux deux types d’anticorps polyclonaux, révèle l’existence de glycopeptides spécifiques dans les fractions immunopurifiées à partir d’extraits solubles d’OSC ; après analyse électrophorétique et électrotransfert, des glycopeptides de poids moléculaire apparent de 240, 150 , 98, 88, 84, 77, 66, 52, 46 et 42 kD chez l’embryon de poulet et de 240, 220, 98, 88, 66, 60, 54, 52 et 50kD chez le bœuf adulte ont pu être visualisés soit par la Con A, soit par la Con A et la WGA. Un glycopeptide de 32 kD révélé dans la fraction immunopurifiée du bulbe rachidien de poulet, pourrait correspondre aux glycoprotéines spécifiques localisées au niveau de la fibre de Reissner. Un anticorps monoclonal, spécifique des sécrétions glycoprotéiques de l’OSC, a été isolé et caractérisé. Grâce à l’utilisation de cet anticorps et de lectines (Con A et WGA), et après coloration à la fuchsine paraldéhyde nous avons pu démontrer, chez des poussins soumis à un choc osmotique, l’existence d’une réponse des épendymocytes de l’OSC se manifestant par une hyperactivité sécrétrice.