Etude de la recombinaison génétique par fusion de protoplastes de Bacillus subtilis

Abstract

La fusion de protoplastes de Bacillus subtilis, décrite pour la première fois par Schaeffer, Cami et Hotchkiss (1), permet la formation de recombinants génétiques présentant des combinaisons nouvelles des marqueurs dérivés de deux lignées auxotrophes parentales différentes. Ce type d’échange génétique permet ainsi d’étudier la recombinaison dans la totalité dugénome bactérien. Un mélange de protoplastes dérivant de deux souches parentales mutées dans différentes régions du chromosome, a été traité par le polyethylène glycol et les produits de régénération de la paroi des protoplastes ont été analysés. Les résultats, en absence de pression de sélection ont montré que l’intervalle contenant l’origine de réplication du chromosome, présente la fréquence la plus élevée d’échanges génétiques. Un des points principaux de nos recherches a été de déterminer le rôle du produit du gène RecE dans les échanges observés. Il apparaît que des événements de recombinaison spécifique de l’origine de réplication du chromosome sont indépendants de l’activité RecE. De même, une corrélation entre les fonctions de réplication du chromosome et la recombinaison génétique a été mise en évidence. Dans la dernière partie de ce travail nous avons observé que les changements dans le profil de méthylation de l’ADN stimulent la recombinaison homologue par un mécanisme totalement dépendant de l’activité RecE