Mise au point et optimisation de nouvelles techniques de screening médicamenteux dans le plasma par HPLC-DAD et GC-MS dans le cadre de la toxicologie analytique d'urgence

Abstract

Le screening toxicologique permet d’apporter des informations rapides et fiables, aussi bien dans la cadre de la prise en charge des intoxications médicamenteuses graves que dans des situations cliniques non évidentes (anamnèse inconnue et orientation clinique insuffisante ou absente). C’est ainsi que nous nous sommes donné comme objectif l’optimisation de nouvelles méthodes chromatographiques pour la réalisation de ce screening. Dans une première partie de ce travail nous avons évalué la place du screening toxicologique de médicaments par HPLC-DAD dans la diagnostic des intoxications médicamenteuses avec une comparaison aux résultats des tests colorimétriques et immunologiques. Cette comparaison entre les deux méthodes a été réalisée pour 107 cas. Par la suite, la méthode d’extraction utilisée pour le screening, a fait l’objet d’une optimisation. Le test d’analyse de variance (ANOVA) à un facteur nous a permis de faire des comparaisons entre les moyennes des rendements et de déterminer le solvant extracteur le plus approprié pour la réalisation du screening médicamenteux par HPLC-DAD. Dans une deuxième partie, nous avons mis au pont une même méthode d’extraction applicable simultanément en HPLC-DAD et GC-MS. Nous avons ensuite évalué de manière prospective sur une période de 12 mois, l’apport de l’application simultanée de la GC-MS et l’HPLC-DAD moyennant une seule méthode d’extraction pour effectuer le screening toxicologique des médicaments au niveau des échantillons plasmatiques de 104 cas d’intoxication. Le potentiel de la méthode développée a été démontré par des rendements d’extraction allant jusqu’à 99%. L’utilisation conjointe de l’HPLC-DAD et la GC-MS a permis d’élargir considérablement le nombre de molécules médicamenteuses identifiées, d’augmenter la fiabilité et la validité des résultats obtenus. De plus, l’utilisation d’un seul protocole d’extraction pour deux techniques chromatographiques contribuerait à minimiser les dépenses en matériels et en réactifs, de diminuer la charge de travail et le délai de transmission des résultats aux patients ce qui est compatible avec le principe de l’urgence clinique. Enfin, une librairie spectrale informatisée permettant l’identification automatique de 100 molécules les plus fréquemment impliquées dans les intoxications médicamenteuses au Maroc et une méthode de dérivation par acétylation sensible à la recherche des benzodiazépines sur GC-MS ont été développées. Le plan d’expérience a permis d mettre en évidence l’effet de chaque facteur sur le réaction d’acétylation développée.