Les sites de la liaison opiaces dans la médullosurrénale bovine : Caractérisation biochimique et bases molléculaires de leur hétérogénéité

Abstract

Ce travail est consacré à l’étude biochimique et pharmacologique des différents types de sites de liaison opiacés présentant dans la glande médullosurrénale bovine. Ce tissu contient des sites opiacés de type delta, mu et kappa, ces derniers se subdivisent en trois sous-type kappa 1, kappa 2 et kappa 3. Nous nous sommes principalement attachés à caractériser et à différencier ces différents sous-types de sites en réalisant : 1- une caractérisation biochimique de ces sites par les enzymes protéolytiques, lipolytiques, les agents alkylants et la température. 2- une étude de l’effet des ions monovalents et bivalents sur la liaison des agonistes opiacés. 3- une étude biochimique des sites de liaison après leur solubilisation. Dans la première partie, nous avons montré que ces sites sont sensibles aux enzymes protéolytiques (alpha-chymotrypsine, trypsine et pepsine), confirmant leur nature protéique. Chacun de ces enzymes affecte la liaison opiacée de manière différente au niveau de chaque site, suggérant une hétérogénéité de ces sites au niveau moléculaire. La phospholipase A2 a une action sur presque tous les sites, traduisant la participation des phospholipides membranaires dans la liaison. L’ensemble des différents sites de liaison est affecté par le NEM à l’exception des sites delta indiquant l’implication des groupements –SH dans la liaison. La température affecte les paramètres de liaison (constante d’affinité et capacité de liaison) des opiacés sur leurs sites. Après analyse thermodynamique, nous avons calculé les paramètres thermodynamiques qui conduisant cette interaction. Les valeurs retrouvées oscillent autour de -14 Kcal/mol pour l’énergie libre (∆ G°), de -2 Kcal/mol pour l’enthalpie (∆ H°) et l’entropie ayant généralement une valeur positive. Toutefois l’ensemble de ces paramètres évolue différemment selon le type de site considéré, suggérant une spécificité de forces moléculaires de la liaison des opiacés sur chaque site. Dans la deuxième partie, nous avons testé l’effet des ions monovalents et bivalents sur la liaison des opiacés avec leurs sites avant et après solubilisation de ces sites. Ces deux approches ont montré que les sites de liaison sont modifiés différemment, suggérant que ces ions agissant sur le site de liaison lui-même. Dans la troisième et dernière partie, nous avons montré que l’étorphine se lie d’une façon covalente aux sites sous l’action du rayonnement ultra-violet, quatre molécules de poids moléculaire différent correspondant à 100, 36, 20 et 16 Kdaltons ont été retrouvées, confirmant l’hétérogénéité moléculaire des sites de liaison opiacés dans la médullosurrénale. En définitive, nos résultats montrent que les sites de liaison opiacés dans la médullosurrénale sont hétérogènes du point de vue moléculaire et que la médullosurrénale par l’abondance des sites opiacés et la facilité de son obtention, représente un bon modèle pour l’analyse et la caractérisation des ces sites.