Expression de gènes spécifiant des précurseurs de neuropeptides, chez un ver marin, Nereis Diversicolor

Abstract

Chez les Néréidiens (Annélides Polychètes). Des neurosécrétions ont été mises en évidence dans des cellules du système nerveux. Nos recherches ont été focalisées sur le précurseur de la cholécystokinine (CCK) et celui de la dynorphine 1-17 et de l’α-néo-endorphine. La caractérisation de ces précurseurs a été le but essentiel de notre travail. En conséquence, nous avons éprouvé les capacités de traduction des ARNm, isolés du cerveau de N.diversicolor dans divers systèmes cellulaire ou acellulaires. Les polypeptides d’intérêt , traduits, ont été mis en évidence en utilisant des anticorps dirigés contre le précurseur de la CCK de mammifères, des anticorps dirigés contre le précurseur de la dyn 1-17 et contre l’α-néo-endorphine de mammifères, et également, des anticorps monoclonaux, spécifiques de Néréidiens. Les techniques immunologiques utilisées montrent l’existence d’un polypeptide traduit in vitro et in ovo, de70 kDa, qui est reconnu par les anticorps précédemment cités. Parmis les protéines isolées du cerveau de l’animal, utilisées comme référence, un polypeptide de masse moléculaire identique a été également reconnu par les anticorps cités. Nous postulons que ce polypeptide de 70kDa soit le précurseur de ces substances peptidiques. Par ailleurs, l’utilisation des anticorps spécifiques de molécules de Néréidiens, montre la présence d’un polypeptide de 28 kDa qui témoigne de l’existence d’au moins un autre type de précurseur dans le cerveau des Néréidiens. Les techniques immunohistochimiques révèlent que les anticorps élaborés contre le précurseur de la CCK de mammifères provoquent une immunoréaction dans des cellules du cerveau, de la chaîne nerveuse ventrale, et également de l’intestin de N.diversicolor. Des cellules constituent probablement le site de synthèse des ARNm spécifiant le précurseur caractérisé. L’ensemble de ces résultats d’immunodétection, nous a incité à élaborer une cDNAthèque d’expression et à prévoir l’utilisation d’une panoplie d’anticorps pour cribler les éventuels clones recombinés par le biais de la reconnaissance de leur protéine de fusion. L’utilisation d’anticorps anti-dyn 1-17 et anti- -néo-endorphine a permis de sélectionner des clones de phages. Ces clones ont été purifiés et amplifiés et amplifiés.