MISE AU POINT D'UNE TECHNIQUE DE PCR-RFLP POUR LA RECHERCHE DE LA MUTATION C.G1449A DU GÈNE CYP1B1 CHEZ DES PATIENTS ATTEINTS DU GLAUCOME CONGÉNITAL PRIMITIF

Abstract

Le glaucome congénital primitif (GCP) est une forme grave de glaucome qui se manifeste tôt dans la vie et peut entraîner une perte de vision irréversible. La mutation c.G1449A au niveau du gène CYP1B1 a été trouvé corrélée au développement du GCP. La recherche mutationnelle au niveau du gène CYP1B1 peut être effectuée en utilisant plusieurs techniques moléculaires(technique de génotypage ou de séquençage). Le séquençage reste la méthode de référence actuellement utilisée pour documenter les mutations et aider au diagnostic et à la prise en charge thérapeutique. Cette étude a pour objectif la mise au point d'une technique PCR - RFLP (Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment Length Polymorphism) pour la recherche et la détection de la mutation c.G1449A au niveau du gène CYP1B1, associe au GCP. L´ADN a été isolé à partir du sang total en utilisant la technique d’extraction aux sels. Après avoir amplifié la région génique cible utilisant trois températures d’hybridation différentes suivie d’une digestion enzymatique par l'enzyme de restriction HPYCH4III, les génotypes sont déterminés par PCR-RFLP. Les produits PCR digérés avec l'enzyme HPYCH4III ont révélé trois bandes distinctes : les tailles des fragments observés étaient de 507 pb, 200 pb, et 178 pb, ce qui est conforme à l'absence de la mutation 1449 G>A dans le gène CYP1B1 pour cet individu. Les résultats préliminaires obtenus ont permis de démontrer l'efficacité de la technique PCRRFLP pour la recherche et la détection de la mutation c.G1449A, fournissant ainsi un outil fiable pour le diagnostic génétique précoce et la prise en charge du GCP.

Mots-clés : Glaucome congénital primitif, gène CYP1B1, mutation c.G1449A, PCR-RFLP, enzyme HPYCH4III.