Contribution au développement d'une méthode de dosage immunoenzymatique de la gamma-glutamyltransferase humaine

Abstract

La gamma-glutamyltransferase (GGT) est une enzyme membranaire de nature glycoprotéïque. Présence dans le plasma, la mesure de son activité dans ce milieu représente un test de premier niveau en Médecine Préventive. L’objectif de notre travail était de mettre au point une méthode de dosage immunoenzymatique de la protéine GGT dans le plasma à l’aide d’anticorps polyclonaux. Dans un premier temps, nous avons purifié cette enzyme à partir du rein humain et vérifié la qualité de la préparation en utilisant deux techniques électrophorétiques : une technique classique en gel de polyacrylamide et en présence de SDS, et la nouvelle technique de microélectrophorèse bidimensionnelle en condition non dénaturante. La bonne qualité de la préparation nous a permis ensuite de procéder à l’immunisation des lapins ; nous avons suivi l’évolution des anticorps anti-GGT par des tests d’immunoprécipitation. Après marquage des immunglobulaines par la péroxydase du raifort, nous avons fait quelques essais d’optimisation des conditions de mesure de la protéine GGT dans un système de type ELISA.