Régulation de la nitrate réductase dans des suspensions cellulaires de chicorée de Bruxelles ( Cichorium intybus L. var. Witloof )

Abstract

Deux suspensions cellulaires de la Chicorée de Bruxelles (Cichorium intybus L. var. Witloof) possèdent des caractéristiques différentes. La souche B₂₂ non organogène prolifère très rapidement et présente donc un cycle de croissance court. La souche A₁₁ a conservé ses potentiels organogènes mais prolifère lentement. La mise au point d’un tampon d’extraction renfermant des inhibiteurs protéasiques et des protecteurs contre l’oxydation des phénols a permis d’extraire et de purifier la nitrate réductase de B₂₂ mais non de A₁₁. La nitrate réductase de B₂₂ est une NADH:NR dont les constantes d’affinité pour le NADH et le NO⁻³ sont respectivement de 2.10⁻⁵ M et 0.8 10⁻⁴M. Le NADH utilisé a une origine mitochondriale et cytoplasmique. L’activité nitrate réductase est maximale au 3ème jour de culture ; elle est étroitement corrélée à l’utilisation du saccharose qui est d’abord hydrolysé dans le milieu avant être utilisé. En présence d’ABA (10⁻⁴M), la croissance cellulaire, l’adsorption et l’assimilation du nitrate sont ralenties, mais l’activité NR est paradoxalement augmentée. L’hydrolyse du saccharose du milieu est également inhibée et le métabolisme des sucres intracellulaires est modifié. La charge énergétique est maintenue constante, elle est identique à celle des cellules témoins. L’accroissement de l’activité NR pourrait être dû à une disponibilité en NADH plus importante où à une modification de la structure ou du "turnover" de la protéine enzymatique.