Caractérisation des alcool-déshydrogénases secondaires microbiennes pour la production d’alcools chiraux et de cétostéroïdes et l’utilisation d’un solvant eutectique approfondi (DES) dans le milieu réactionnel

Abstract

Une partie de cette thèse concerne la caractérisation et la purification d'une alcool déshydrogénase secondaire et d'une cholestérol oxydase à partir de cellules bactériennes du genre Rhodococcus. Les souches utilisées étaient GK1: Rhodococcus equi, GK3: Rhodococcus opacus, GK12: Rhodococcus erythropolis. Elles ont été utilisées pour évaluer leur capacité à cataboliser les stérols. Les étapes du catabolisme des stérols comprennent le catabolisme de la chaîne latérale et la dégradation du noyau stéroïdien. Afin d’obtenir des dérivés intéressants, des ions de cobalt et de nickel ont été ajoutés au milieu réactionnel pour inhiber la dégradation du noyau stéroïdien et obtenir des dérivés tels que la 4-androstène- 3,17-dione (AD) et le 1,4-androstadiène-3,17-dione (ADD). La deuxième partie de la thèse concerne l’utilisation d’un solvant approfondi (DES) contenant des enzymes ADH de différentes bactéries, du genre Rhodococcus et Ralstonia, et les enzymes ADH de ces souches bactériennes ont été surexprimées dans les cellules d’Escherichia coli (E. coli). Lorsque 300 à 400 mM de céto-substrats halogénés ont été utilisés dans les réactions avec DES, d'excellents résultats de conversion et d’excès énantiomérique ont été obtenus. Les meilleurs résultats ont été observés lorsque des ADHs de Lactobacillus brevis et de Rhodococcus ruber ont été utilisés. Enfin, des réactions en grandes quantités ont été réalisées donnant de bons résultats.