Purification et caractérisation de la pyrophosphatase alcaline : Implication dans la synthèse des caroténoïdes

Abstract

En raison de leur importance économique les caroténoïdes font l’objet de nombreuses recherches. Afin d’améliorer leur production, les enzymes impliquées dans la caroténogenèse constituent un cible privilégiée. En hydrolysant le pyrophosphate (PPi) résultant de cette biosynthèse la Pyrophosphatase alcaline (PPase) semble contribuer à la régulation de cette caroténogenèse. Cette enzyme a été caractérisée aussi bien chez les chromoplastes que chez les chloroplastes isolés de fruits de Capsicum annuum.. L’impossibilité de maîtriser les facteurs de maturation du fruit de C. annuum donc d’étudier la relation entre l’activité PPasique et la caroténogenèse lors de l’évolution des chloroplastes en chromoplastes nous a conduit à travailler sur une algue unicellulaire Dunaliella salina. Chez cette algue nous mettons en évidence et pour la première fois une corrélation entre l’activité PPasique et celle de la synthèse du β–carotène. Cette PPase a été purifiée, il s’agit d’une protéine de masse moléculaire de l’ordre de 60 kDa, qui réagit positivement avec les anticorps anti-PPase de levure, cependant les anticorps anti-PPase tonoplastique ne reconnaissent pas cette protéine. L’immunolocalisation de cette protéine a la périphérie du pyrénoïde du plaste de D. salina est conforme à notre localisation de la quasi-totalité de l’activité pyrophosphatasique au niveau de la fraction stromatique. Ces observations serait en accord avec le rôle physiologique que l’on associé à cette PPase.