Obtention d'anticorps monoclonaux anti-œstrogènes de hautes affinité et leur utilisation pour la mise au point d'immunodosages non radioactifs

Abstract

La mise au point de méthodes immunologiques appliquées au dosage d’haptènes nécessite la mise en œuvre de technologies particulières du fait : - des faibles affinités généralement obtenues pour les anticorps anti-haptène. - de la difficulté d’immobilisation des haptènes sur le support solide - de la nécessité d’amplifier le signal de la sonde dans le cas de dosages de haute sensibilité.

L’objectif de ce travail est de mettre au point des méthodes immunocompétitives, non isotopiques, sensibles et fiables pour les dosages cliniques des hormones stéroïdiques, en particulier les œstrogènes plasmatiques ou ordinaires chez la femme.

Dans une première étape, nous avons sélectionnée et obtenus des anticorps monoclonaux anti-œstrogènes de haute affinité (1.4 et 2.10¹º M⁻¹) et d’étroite spécificité, après une étude de différents types d’immunogènes et d’immunisations. Dans une deuxième étape nous avons effectué à la synthèse de différents immunoréactifs : - le marquage des anticorps par des sondes fluorescentes et par des sondes enzymatiques. Ces marquages ont été effectués soit directement soit indirectement par l’’intermédiaire du système biotine/avidine. - le couplage des stéroïdes à des protéines permettant leur immobilisation sur les supports solides.

Dans une troisième étape nous avons développé quatre types d’immunodosages : - un fluoroimmunodosage des stéroïdes a été effectué à l’aide d’un fluorimètre à excitation laser hautement sensible, mais au point par une équipe du CNAM. - un enzymoimmunodosage de l’œstradiol plasmatique chez la femme. - un enzymoimmunodosage "Dot-Blot" des stéroïdes et sa quantification au moyen d’un système de double fibres optiques. Cette même méthode permet la réalisation des bandelettes test à réponse "tout ou rien" pour déceler la période de fertilité chez la femme.