Antigénicité de la spiraline

Abstract

Cette thèse est consacrée à l’étude des propriétés antigéniques de la spiraline, protéine majoritaire de la membrane de Spiroplasma citri (WROBLEWSKI et coll., 1977, Biochim. Biophys. Acta, 465, 275-289). Ce travail a été réalisé en utilisant en particulier l’immunoélectrophorèse bidimensionnelle et deux techniques d’immunoempreintes ("Dot blotting" et "Western blotting"). Les principaux résultats obtenus sont les suivants : (1) contrairement aux protéines hydrosolubles. La spiraline possède une structure antigénique très stable où les ponts disulfures ne jouent pas un rôle déterminant ; les effets de l’urée, du SDS et de la température (100° C) sont réversibles ; la renaturation de la spiraline est facilitée par les détergents non dénaturants. (2) Le composant majoritaire de la membrane de S. melliferum est, par ses propriétés immunochimiques (composition en acides aminés et antigénicité), une protéine homologue de la spiraline de S. citri. (3) La recherche de parentés antigéniques montre que d’autres espèces de spiroplasmes contiennent vraisemblablement de la spiraline. Il s’agit en particulier de s. floricola et S. apis. (4) Une mesure quantitative des immunoempreintes permet d’évaluer les distances antigéniques séparant les spiralines isolées à partir des différentes espèces, ce qui offre des applications dans le domaine de la taxonomie et de la phylogénie des spiroplasmes. (5) Les anticorps anti-spiraline possèdent une spécificité suffisante pour identifier les spiroplames du groupe sérologique I et distinguer les souches de S. citri (sous-groupe I-1) des souches de s. melliferum (sous-groupe I-2). La spiraline est, en effet, une protéine antigéniquement peu conservée, ce qui suggère qu’il est de même pour sa structure primaire. Cette hypothèse est supportée par les différences importantes observées parmis les cartes peptidiques de spiralines isolées à partir de différentes espèces. (6) Un peptide hydrosoluble de 13,5 kDa a été purifié par électrophorèse préparative à partir de la spiraline de S. melliferum clivée par la trypsine. Ce fragment contient au moins trois épitopes dont un au moins commun à la spiraline de S. citri.