Purification et caractérisation du récepteur des glucocorticoïdes sous forme transformée - Belahsen, Youness (Université des Sciences et Techniques de Lille - Flandres-Artois, Lille, 1987)
Le travail réalisé dans cette thèse a consisté en la mise au point de deux protocoles différents de purification du récepteur des glucocorticoïdes sous forme transformée. Le premier utilise une méthode classique largement utilisée par les spécialistes dans ce domaine. Il s’agit de la chromatographie sur support polyanionique (DNA-cellulose et phosphocellulose). Les résultats que nous avons obtenus étaient moyens. Cependant, nous avons préféré remplacer ce protocole par un autre protocole original de purification utilisant la chromatographie d’échange d’ions à haute performance (HPIEC). Il a été mis au point et testé sur le plan analytique sur le récepteur des glucocorticoïdes de foie de lapin par P. Lustenberger. Nous avons développé une méthode de purification en deux étapes du récepteur des glucocorticoïdes de foie de rat dans un but préparatif. La première étape utilise la précipitation au sulfate de protamine, la deuxième étape l’HPLEC. La préparation obtenue a été purifiée 1200 fois environ avec un rendement de 23%. Le récepteur purifié a été caractérisé du point de vue physicochimique, et s’est révélé identique à la protéine native présente dans le cytosol. Nous avons ensuite envisagé de compléter la purification par une méthode tout récemment décrite dans la littérature. Celle-ci consiste en une chromatographie d’affinité du récepteur sur une colonne d’ADN-agarose, contenant l’ADN spécifique. Nous avons étudié les conditions de fixation à l’agarose d’un polymère de la séquence spécifique de liaison du récepteur des glucocorticoïdes présents sur le gène de l’hormone de croissance humaine.
Keywords: Biochimie; Récepteur; Glucocorticoïde