Étude de la transmission des transgénes chez la descendance des chicorées transgéniques induction du promoteur TR2’ par régulateurs de croissance et par des blessures

Abstract

La transformation génétique de Cichorium intybus L.a été réussie avec plusieurs souches d’Agrobacterium tumefaciens. Les feuilles et les cotylédons régénèrent des bourgeons stablement transformés. L’efficacité de transformation a été améliorée chez les feuilles par une étape de pré culture en présence du 2,4-D utilisé à différentes concentrations. Toutefois, les cotylédons constituent un organe de transformation plus facile et plus rapide sans étape de pré culture. De plus, les analyses par microscopie électronique montent une forte densité des bactéries sur les tissus cotylédonaires comparés aux tissus foliaires. Les analyses de l’activité du gène de la ɞ-glucuronidase sous le promoteur TR2’ montrent une activité dans l’apex racinaire et dans les tissus vasculaires des feuilles et des boutons floraux. Ces activités ont été maintenues au fil des générations puisque les mêmes expressions ont été retrouvées chez les descendants de la génération F1, F2 et F3. L’expression GUS est induite dans les racines et les feuilles suite à des blessures ou à des traitements par des régulateurs de croissance (2,4-D ou ABA). Les analyses par Northern de l’induction du gène TR2 ‘ sur les feuilles blessées ou traitées par ces phytohormones à différents temps montrent une régulation transcriptionnelle par accumulation du taux des ARN messagers relatifs au gène GUS. Sous le contrôle du promoteur 35S CaMV, l’expression est présente dans tous les tissus de la jeune racine alors que dans la racine mature, l’activité est absente dans la stèle. Tous les tissus de la feuille, de l’ovule et des anthères montrent une activité GUS. Un résultat semblable est retrouvé chez les descendants de la génération F1 et f2 des plantes transgéniques. L’expression est absente dans le pollen est ceci quelques soit le promoteur utilisé. La commercialisation et la valeur économique des cultures génétiquement modifiés sont déterminées par une transmission stable et une expression des transgénes dans les générations successives. Le taux de ségrégation du gène nptII dans les générations F1, F2 et F3 issues par autofécondation indique dans la majorité des cas une transmission mono génique et dominante du gène nptII. Cependant chez les plantes ayant un nombre élevé de copies (plante 1 et 3) une transmission inversée du transgénes dans la génération F1 et qui continue pour les descendants de la plante 2 dans la génération F2. Les analyses moléculaires de l’insertion des transgénes montrent que la perte des copies concernent aussi bien les plantes à un seul ou à plusieurs ADN-t. cependant, les plantes ayant un nombre de copie élevé présentent plus de délections et de réarrangements (exemple plante 1 et 2). Le transfert de gène chez la chicorée permet d’étudier la régulation des gènes et l’introduction de gènes à caractère agronomique important dans les différentes variétés de la chicorée. De plus, la racine tubérisée de la variété Magdebourg est une source potentielle de les fructanes, ainsi la transformation de cette variété est un outil pour améliorer la qualité et la quantité des fructanes stockés.