Etude des effets de deux plantes médicinales : Arbutus unedo et urtica dioica sur la fonction plaquettaire chez le rat et chez l'homme : Recherche de l'effet antiagrégant et exploration du mécanisme d'action

Abstract

Les plaquettes sanguines jouent un rôle primordial dans l’hémostase et la coagulation. Cependant, leur hyperactivation est impliquée dans la pathogénie et la progression des complications vasculaires associées aux maladies cardiovasculaires et au diabète. Dans une étude de criblage, nous avons examiné in vitro les propriétés anti-agrégantes plaquettaires de cinq plantes médicinales (Petroselinum crispum, Urtica dioïca, Arbutus unedo, Equisetum arvense et Cistus ladaniferus) chez le rat. L’agrégation plaquettaire a été mesurée par agrégométrie. L’incubation des plaquettes sanguines avec l’extrait aqueux brut (EAB) des différentes plantes inhibe de manière dose dépendante l’agrégation plaquettaire induite par la thrombine ou l’ATP. A l’issue de cette étude, deux plantes (A. unedo et U. dioica) ont été sélectionnées pour la suite du travail. Afin de localiser la fraction active responsable de l’effet antiagrégant, une extraction successive au soxhlet pour les feuilles des deux plantes a été réalisée en utilisant des solvants de polarité croissante. Parmi les fractions testées, seules les fractions méthanolique et acétate d’éthyle pour a. unedo et la fraction acétate d’éthyle pour A. unedo et la fraction acétate d’éthyle pour U. dioica qui se sont révélées les plus actives. De plus, l’isolement des flavonoïdes des deux plantes et des tanins d’A. unedo a montré l’implication de ces composés polyphénoliques dans l’effet antiagrégant. Pour vérifier cet effet chez les plaquettes humaines et afin d’explorer le mécanisme intracellulaire impliqué dans l’effet antiagrégant, nous avons examiné les propriétés antiagrégantes des deux plantes chez l’Homme. La concentration intracellulaire du calcium et la production des espèces réactives d’oxygène (ROS) ont été mesurées par spectrofiuorimétrie en utilisant respectivement le fura-2 et la dichlorodihydrofluoresceine. La phosphorylation des protéines tyrosines kinases (PTK) a été détectée par Western Blotting. L’incubation des plaquettes sanguines avec l’EAB d’A. unedo (0,015-1,5 mg/ml) et d’U. dioica (0,05-3 mg/ml) ou par les flavonoïdes isolés d’A. unedo inhibe l’agrégation plaquettaire induite in vitro par la thrombine et empêche la production des ROS. L’incubation des plaquettes humaines en présence des extraits (0,05 mg/ml) des deux plantes n’a pas d’effet sur la libération du Ca²⁺ induite par la thrombine mais réduit de manière significative l’entré capacitative du Ca²⁺ induite par la thrombine ou par la déplétion sélective des deux réserves plaquettaires de Ca²⁺ (système tubulaire dense et lysosomes). De plus, l’incubation des plaquettes avec les extraits réduit significativement la phosphorylation des PTK de base et après stimulation par la thrombine. D’autre part, U. dioica a été testée également sur les plaquettes de sujets diabétiques de type 2. Nos résultats ont mis en évidence l’hyperactivité des plaquettes des diabétiques vis-à-vis de la thrombine par U. dioica réduit l’agrégation, empêche la production des ROS induite par la thrombine et normalise la concentration intracellulaire du calcium et la phosphorylation des PTK dans les plaquettes des diabétiques. En conclusion, nos résultats montrent que les deux plantes testées ont des propriétés antiagrégantes médiées principalement par les composés polyphénoliques. Le mécanisme d’action pourrait impliquer une réduction de la mobilisation du Ca²⁺ ; de la production des Ros et de la phosphorylation des protéines tyrosines kinases. Ces résultats renforcent l’utilisation traditionnelle des deux plantes dans le traitement et/ou la prévision des complications des maladies cardiovasculaires liées à l’hyperactivation plaquettaire.