Recherche de substances antifongiques à partir d'une collection de souches d'actinomycète d'origine et à partir d'une chimiothèque

Abstract

L’objectif de ce travail a été la recherche de substances antifongiques à partir d’une collection de souches d’actinomycète d’origine clinique et à partir d’une chimiothèque. Une première partie expérimentale a été consacrée à la recherche de substances antifongiques de structure non-polyénique à partir de souches d’actinomycète d’origine clinique. Un criblage « non orienté » de 110 souches a été effectué contre 3 souches de levures et 3 souches de champignons filamenteux. Sur 54 souches actives, 5 appartenant au genre Streptomyces ont inhibés tous les microorganismes tests. La production de substances antifongiques de structure non-polyénique par ces 5 souches a été étudiée par l’analyse su spectre antibactérien. L’inhibition par l’ergostérol et l’analyse des spectres UV-visible des extraits actifs (criblage « orienté »). Deux souches, Streptomyces sp. 96.0333 et Streptomyces sp. 98.0395, ont été retenues pour l’étude d’optimisation des conditions de production, d’extraction à grande échelle et de purification des principes actifs. Deux produits, C 395 et G 395 de structure non-polyénique ont été isolés à partir de Streptomyces sp. 98.0395. Par ailleurs une fraction active Al-333 a été isolée de Streptomyces sp. 96.0333. L’analyse des différents spectres UV, IR et RMN a permis d’identifier cette fraction Al-333 comme un mélange de 3 glycérides. La présente, surtout, de 1,3-diglycéride, ainsi que de triglycéride, indiquent la présence possible d’une molécule antifongique de structure nouvelle. L’absence de toxicité in vitro et in vivo se cette fraction active comparée à celle de l’amphotéricine B renforce l’intérêt de ce produit. La souche Streptomyces sp. 96.0333 a été partiellement identifiée par séquençage du gène codant la petite sous unité de l’ADNr 16S, suivie par la comparaison d’une centaine de caractères phénotypiques avec ceux d’espèces phylogénétiquement proches. Dans une deuxième partie expérimentale, 18 produits de synthèse appartenant à une chimiothèque ont été testés pour leur activité antifongique contre 6 souches de champignons. Seul le produit M1 a montré une fore activité vis-à-vis de tous les germes cibles. La concentration minimale inhibitrice (CMI), contre les 6 espèces de champignons sélectionnées, a été déterminée. La sensibilité des souches C. tropicallis R₂ et F. oxysporum CIP 625.72 s’est révélée importante vis-à-vis du produit M1 par rapport à l’amphotéricine B. En outre, le produit M1 s’est montré plus actif que l’amphotéricine B en inhibant la croissance sur milieu YMA de C. albicans ATCC 10231 et A. fumigatus CIP 1082.74. Il s’est révélé également plus actif pour la souche se a. niger ATCC 16404 sur milieu casitone. En comparaison avec les données de la littérature, la CMI de ce produit a été remarquable vis-à-vis des autres agents antifongiques actuellement utilisés en clinique.