Inactivation et sélectivité des canaux calciques lents du muscle lisse utérin

Abstract

L’étude de la conductance calcique des cellules myométriales de rattes gestantes est limitée par la présence de courants potassiques à cinétique rapide qui interfèrent avec le courant calcique, en particulier lors de son inactivation. L’inhibition des courants potassiques est obtenue par une préincubation des préparations en solution 125 mM CsCl et par l’addition de tétraéthylammonium et de 4-aminopyridine (10 mM). Dans ces conditions, l’amplitude et la durée des potentiels d’action sont notablement accrues. L’inactivation du canal calcique est étudiée en présence d’ions divalents (Ca, Ba) et monovalent (Na, en solution dépourvue de Ca additionnée de 1 mM EGTA) dans le but de préciser si le courant s’inactive selon un mécanisme dépendant du potentiel de membrane, du courant lui-même ou selon une combinaison de ces deux mécanismes. La mesure du potentiel d’inversion apparent du courant Ba permet d’exclure qu’une accumulation ou un épuisement des charges à proximité de la membrane puisse rendre compte de la décroissance du courant en fonction du temps. L’inactivation du canal Ca persiste quand les ions Ba ou Na Remplacent les ions Ca ; la cinétique d’inactivation est fortement ralentie. Cet effet ne peut être expliqué par une variation des charges membranaires de surface. Les résultats obtenus sont interprétés en proposant que l’inactivation du courant Ba ou Na reflète un processus uniquement dépendant du potentiel de membrane, alors que l’inactivation du courant Ca dépend de l’influx Ca et du potentiel de membrane. La sélectivité du canal peut être étudiée en mélangeant dans la solution test deux ions à différentes concentrations et capables de traverser le canal. Ainsi, le canal Ca lent du myomètre présente une forte sélectivité pour les ions Ca, qui dépendrait d’un mécanisme de perméation basé sur l’existence de deux sites de liaison à haute affinité calcique à l’intérieur du canal. Le transfert des charges s’effectuerait par répulsion électrostatique. Les effets des mélanges Ca + Ba, Ca + Na et Ba + Sr sur le courant lent indiquent que les sites de liaison présenteraient la séquence d’affinité suivante : Ca > Sr > Ba > Na. Enfin, la présence de canaux Na sensibles à la tétrodotoxine a pu être mise en évidence par l’utilisation de toxines d’anémone de mer et de vératridine.