Contribution à l'étude des mécanismes de déacylation et de réacylation des phospholipides plaquettaires

Abstract

La stimulation des plaquettes entraîne la formation d’eicosanoïdes dont le précurseur direct est l’acide arachidonique (AA) libre. Il existe des mécanismes qui permettent d’une part de maintenir un taux très faible d’AA dans les plaquettes au repos, et d’autre part de le libérer pour qu’il soit transformé lorsque les plaquettes sont stimulées. Les transacylases et la phospholipase A₂ sont des enzymes clés qui interviennent dans la régulation de la disponibilité en AA ce qui explique l’intérêt porté à l’étude de ces enzymes dans les plaquettes. L’étude des mécanismes d’acylation des lysodérivés exogènes par les plaquettes montre l’existence de différentes voies d’acylation des lysodérivés : - les plaquettes catalysent une acylation spécifique de l’AA par l’intermédiaire d’une réaction de transacylation CoA-indépendante. – la voie CoA-dépendante joue un rôle primordial dans la synthèse des espèces disaturés. L’importance de ces espèces disaturés peut rendre compte de la différence dans la libération de l’AA observée entre les plaquettes humaines et les plaquettes de rat. Nous nous sommes intéressées aussi à l’effet du calcium sur les différentes voies d’acylation des lysodérivés et la liaison entre la transacylation CoA-dépendante et l’hydrolyse des phospholipides. Nous avons montré que l’inhibition des transacylases par le calcium n’est qu’apparente et que le calcium étant donnée le taux de lysodérivés formés loin d’inhiber la réaction de transacylation soit au contraire un facteur de stimulation. Pour expliquer la libération préférentielle de l’AA, nous avons fait l’hypothèse de l’action simultanée d’une phospholipase A₂ et d’une transacylase spécifique. Nous avons donc cherché à savoir s’il existait une entité protéique capable de réaliser tout à la fois le transfert et l’hydrolyse ou si ces deux réactions étaient catalysées par deux entités différentes. Les différences observées dans la sécrétion des activités phospholipasique et transacylasique par les plaquettes stimulées montrent clairement que la phospholipase A₂ et la transacylase secrétés sont deux entités protéiques distinctes. La stimulation des plaquettes entraîne aussi une libération d’une activité lysophospholipase. Les activités phospholipase A₂, lysophospholipase, transacylase peuvent être séparées par un simple gel de séphadex. La majeure partie des deux premières, une faible partie de la troisième sont libérées. Les activités qui restent associées aux membranes plaquettaires pourraient être responsable de la libération préférentielle de l’AA observée après stimulation. Cependant la relation entre les activités non libérées reste à déterminer.