Caractérisation Moléculaire des Souches Marocaines des Capripoxvirus et développement d’un Vaccin Inactivé Adjuvé contre la Clavelée Ovine au Maroc

Abstract

La clavelée ou la variole ovine (SP) est une maladie qui affecte les moutons, entraînant des pertes économiques très considérables. L’agent causal est un virus à ADN, double brin de taille 150 kpb, appartenant à la famille des poxvirus (Poxvirinae). La Maladie est présente au Maroc sous forme enzootique. Cette thèse décrit des études expérimentales sur différents volets de classification phylogénétique, pathogénicité, immunogénicité et vaccination contre le virus du SP au Maroc. L’étude moléculaire et phylogénétique (Chapitre I partie 2) du virus de la clavelée (SPV) au Maroc a été réalisée sur un échantillonnage de 35 échantillons dont 29 sont des souches virales et 6 sont des souches de références et vaccinales. Les isolats utilisés dans cette étude s’étalent sur différentes années (de 1981 à 2010) et régions du royaume. Les résultats de l’analyse moléculaire réalisée par le séquençage de deux gènes différents, a montré qu’en se basant sur le gène P32 tous les isolats Marocains sont étroitement liés, ramifiés et groupés avec les autres souches de références du SPV. Quant au gène codant pour la RPO30, seulement 21 isolats ont été amplifiés et séquencés en utilisant les amorces spécifiques de ce gène, mais 20 d’entre eux ont été groupés avec les souches de référence SPV et la souche de la région d’Azilal a été groupée avec les souches de référence de la maladie de la dermatose nodulaire contagieuse (LSDV). L’analyse des séquences obtenues pour le gène qui code pour la P32 a montré une hyperconservation chez tous les isolats marocains et les souches de référence. Concernant l’analyse de séquence du gène qui code pour la RPO30 les 20 isolats marocains sont identiques, par contre pour la souche vaccinale utilisée au Maroc, une mutation a été détectée. L’évaluation du pouvoir pathogène (Partie 2 Chapitre II) a été réalisée sur six souches Marocaines du SPV, isolées entre les années 1993 et 1994, durant la période épizootique de la maladie au Maroc. Les isolats sélectionnés ont montré des ECP caractéristiques, avec des titres infectieux différents, les souches de Berkane, Oujda ont présenté des titres importants sur cellules. L’expérimentation a été réalisée sur des moutons jeunes et séronégatifs à la SP. Les moutons infectés ont présenté des signes cliniques contribués à la SP avec des degrés de gravité différents. La souche de Berkane a présenté des signes cliniques aigus en comparaison avec les autres souches, surtout celle d’Azilal qui n’a montré aucun signe de pathogénicité chez l’animal infecté. Le titre infectieux le plus élevé sur mouton a été obtenu par la souche de Berkane. Le 3ème chapitre de la partie expérimentale consiste à réaliser une comparaison des deux structures 3D des protéines P32 et RPO30 de la souche Berkane la plus pathogène et la souche vaccinale atténuée Romania, par la voie de la modélisation moléculaire, afin de déterminer s’il y’a des modifications qui peuvent altérer la pathogénicité, et ce, par la prédiction des épitopes neutralisants des deux souches et la détermination de leur mécanisme d’action. Les résultats obtenus ont montré que, pour la P32, elle n’a pas montré de modification à cause de la conservation totale de la séquence protéique, d’autre part, la RPO30 a montré des mutations au niveau de la région C-terminal, ce qui diminue le score prédictif des épitopes chez la souche vaccinale. Le 4ème chapitre de la 2ème partie contribue à la production d’un nouveau vaccin inactivé à partir d’une souche Marocaine pure adapté à la pathologie locale. Le vaccin produit a conféré une très bonne protection chez les moutons vaccinés avec des indices de protection élevés et sans signes cliniques liés à la clavelée ovine. Ce travail a permis de bien identifier les souches virales du SPV qui ont déjà circulées au Maroc entre les années 1981 et 2010, ainsi que le développement d'un nouveau vaccin, à partir d’une souche locale, afin de contribuer à la résolution de la problématique liée à la maladie du SP au Maroc.